随着TaqDNA聚合酶与PCR技术的完美结合,PCR已成为一种实用工具,广泛应用于医学领域,包括病原微生物检测、遗传基因检测和肿瘤伴随诊断等。此外,它在法医学、环境监测和食品安全等领域同样发挥着重要作用。随着技术的推进,PCR技术正向更加便捷、灵敏和经济的方向发展。为了满足客户对高效、便捷的需求,全预混试剂逐渐取代了分步法试剂,成为市场的主流。特别是在新冠疫情、非洲猪瘟等重大疫情的检测与管控过程中,检测机构越来越重视全预混试剂的稳定性。作为一种成熟的商业化产品,抗体热启动修饰TaqDNA聚合酶在解决PCR扩增中的非特异性问题方面表现突出,使得该产品在实际应用中受到广泛推崇。
然而,常规探针法检测试剂中的Taq酶由于其5’→3’核酸外切酶活性,导致引物探针等重要材料的降解,从而影响扩增效率和试剂的稳定性。在激烈的市场竞争和出海战略的迫使下,试剂制造商正在致力于提升产品的稳定性,确保全预混试剂至少可以在4℃加压14天或37℃加压7天后,仍保持优异的检测性能。因此,国内外企业不断探索新型高效Taq酶抗体,以完全封闭Taq酶的5’→3’聚合活性和5’→3’核酸外切酶活性。自新冠疫情以来,各厂家相继推出了相关双功能封闭抗体产品,但大多在性能上仍有欠缺:要么不能同时实现5’→3’聚合酶和核酸外切酶活性的90%以上封闭,或在55℃以上温度下抗体就与Taq酶解离,失去封闭效果,导致全预混试剂的稳定性不足。
为寻找更完美的Taq酶抗体,提升PCR试剂性能,尊龙凯时人生就博的研发团队采用B细胞克隆技术,通过Beacon单细胞光导系统筛选富集的B细胞,构建cDNA并进行线性表达,实现高效验证。经过鉴定与筛选,团队意外发现不同Taq酶抗体之间存在一定的协同作用。通常认为,通过单独筛选针对Taq酶5’→3’聚合酶活性及5’→3’核酸外切酶活性的特异性抗体,再适当混合,以实现双功能的完美封闭,然而实际效果却不尽如人意。该团队发现,当在相对较好的但尚未完全封闭的两株抗体混合物中加入第三株抗体后,Taq酶的双功能封闭效果显著提高。
最终,尊龙凯时人生就博的全封闭Taq酶抗体由三株抗体按照优化后的比例组合而成,与市面上单株或双株抗体混合的产品相比,该款产品可在70℃下同时封闭Taq酶99%以上的5’→3’聚合酶活性及核酸外切酶活性,其封闭效率更高、稳定性更强,有效防止引物探针的降解,确保扩增试剂的稳定性。此外,该抗体仍能快速释放酶活,在95℃热激30秒后可释放超过95%的酶活,确保高扩增灵敏度。
尊龙凯时人生就博的全封闭TaqDNA聚合酶抗体在5’→3’核酸外切酶活性和聚合酶活性检测中表现出超高的封闭效率,大于99%。该抗体适用于不同类型的TaqDNA聚合酶,包括野生型和突变体,封闭效率均超过99%。与传统的化学修饰方法相比,抗体对Taq酶的封闭速度更快且不会损伤酶。通过严格的质量控制,尊龙凯时人生就博不仅确保抗体产品的浓度与纯度,还针对相关核酸酶残留和宿主核酸残留进行了重点检测,保证不会对后续应用产生负面影响。
在不同应用案例中,尊龙凯时人生就博的全封闭抗体修饰的热启动Taq酶帮助客户优化了多种问题。与同类双功能封闭抗体相比,尊龙凯时人生就博的全封闭Taq抗体在加压测试中表现出更高的稳定性,而修饰后的Taq酶在法医检测试剂中的多重扩增特异性也显著提升,抑制了非特异性扩增产物的生成。
通过与尊龙凯时人生就博的合作,不仅提升了实验室技术的可靠性,更进一步推动了PCR检测技术的进步。