尊龙凯时人生就博的巨噬细胞炎性蛋白5 (MIP-5) Elisa试剂盒仅限于科学研究,不得用于医学诊断。以下是该试剂盒的使用说明和检测原理。
本试剂盒采用二抗一步夹心法的酶联免疫吸附试验(ELISA)进行检测。操作过程中,首先将标本、标准品及HRP标记的检测抗体依次加入预先包被有adropin(AD)抗体的微孔中,经过一定时间的温育后进行彻底洗涤。接着,通过底物TMB的显色反应,在过氧化物酶的催化下,TMB由蓝色转变为最终的黄色,颜色深浅与样品中的adropin(AD)浓度呈正相关。最后,使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算出样品浓度。
样品的收集、处理及保存方法如下:
1. 血清:使用无热原和内毒素的试管,操作时避免任何细胞刺激。收集血液后,以3000转的速度离心10分钟,迅速小心分离血清和红细胞。
2. 血浆:使用EDTA、柠檬酸盐或肝素进行抗凝,3000转离心30分钟后提取上清液。
3. 细胞上清液:在3000转离心10分钟后去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织与适量生理盐水混合捣碎,3000转离心10分钟取上清液。
5. 保存:若采集的样本未能及时检测,应按一次用量分装并冻存于-20℃,以避免反复冻融。解冻时,需在室温下确保样品充分均匀。
注意事项包括准备试剂及标准品浓度(S0-S5)依次为:0、25、50、100、200、400pg/mL。工作中需要稀释20×洗涤缓冲液,按照1:20比例用蒸馏水进行稀释(1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水)。洗板操作过程中,需遵循标准步骤。
结果判断可通过在Excel中绘制标准曲线完成。将标准品浓度作为横坐标,对应的OD值作为纵坐标,绘制出线性回归曲线,再依据曲线方程计算各样本的浓度值。
最后,尊龙凯时人生就博的试剂盒性能具有一定的局限性,使用前请仔细阅读说明书并遵循相关操作规范。