尊龙凯时人生就博提供的大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）培养指南，旨在确保您的细胞培养过程顺利高效。以下是详细的培养条件、处理方法和注意事项。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法：首次建议1:2传代，传代后每两天更换培养基。如对比实验效果不佳，建议直接使用尊龙凯时人生就博的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，应将其培养至良好状态。添加完全培养液并封好瓶口，这是确保细胞运输安全的最佳方法。在接收细胞时，首先用75%酒精对细胞瓶全外壁喷洒消毒，然后放入超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱内静置3-4小时以恢复稳定状态，再进行后续操作。使用显微镜观察细胞生长情况，并记录不同倍数的观察图片（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片为重要售后依据。如未提供照片，默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

如细胞汇合度未超过80%，请收集培养液并保存5ml完全培养基于37℃、5% CO2培养箱中继续培养；若细胞密度超过80%，可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用PBS缓冲液洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2 ml至培养瓶，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞状态，若细胞变圆并脱落，轻轻敲击培养瓶，加5 ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打以完全脱落的细胞后，吸出并转移至15 ml离心管中，1000 RPM下离心5分钟，弃去上清，加入1-2 ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代补充新培养基至5-8 ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

b、细胞冻存

细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，先弃去培养液并用PBS洗涤一次。然后添加0.25%胰蛋白酶消化液约1 ml，轻轻观察细胞变化，用5 ml完全培养基终止消化过程。接着，将悬液转移至15 ml离心管中，1000 RPM下离心5分钟，弃去上清并重悬于1 ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中。最后，在-80℃冰箱中存放细胞，若需转入液氮罐，则应在-80℃保存24小时以上后再进行转换。

c、细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管，快速放入37℃水浴中解冻，直到无结晶后用75%酒精擦拭外壁。将细胞转移至含5 ml完全培养基的15 ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；弃去上清后，重悬细胞接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2培养箱中继续培养。第二天更换为新鲜的完全培养基。

四、注意事项

在运输过程中，某些细胞因贴壁不牢而可能脱落，属正常现象。若细胞脱落严重，可按以下步骤处理： 收集所有培养液至离心管中，1000 RPM离心5分钟，收集上清用于过渡培养。再加入胰酶1-2 ml，轻轻吹打后消化1-2分钟，终止消化，离心、重悬后按1:2比例进行分瓶传代补充培养基。

五、售后条款

尊龙凯时人生就博对细胞的售后问题有明确的处理条款：

1. 若细胞在运输过程中出现突发问题（如丢失、破损、漏液等），可重发。
2. 细胞污染需在收到产品48小时内报告，并提供实验结果，经过核实后可重发。
3. 若常温发货细胞在24小时后复苏或干冰运输细胞复苏后24小时仍未存活（需提供照片），可重发。
4. 细胞活性问题需在收到产品7天内提供台盼蓝染色法实验结果，核实后可重发。
5. 收到后的前三天需拍照，若超过三天未告知问题，视为产品合格。

对于客户造成的细胞污染、不正确操作或使用非推荐培养体系下的细胞状态不佳等情况，将不予重发。请确保您的操作规范，以保障细胞的健康和活性。