产品简介

衍生化技术主要用于提升目标物质的可检测性，从而增强检测器对目标物质的响应能力。在弱碱性溶液中，OPA和3-MPA能与氨基酸中的羰基和氨基反应，生成衍生物。这些衍生物在紫外光激发后，将释放出波长更长的光，即荧光。衍生物的荧光强度与其浓度呈正比，因此可以通过荧光强度计算出样品中氨基酸的含量。这种分析方法具备快速测定、高准确率、高灵敏度和广泛适用性的优点。

产品信息：

货号：SDK1010
名称：氨基酸衍生化试剂盒（OPA法，不含标准品）
规格：25T/50T
储存条件：2-8℃
注：如需更多信息，请联系网站负责人。

组分

实验步骤：

1. 流动相A的配制：将适量的超纯水分别溶解流动相A1、A2和A3，后将其移至1L容量瓶中，充分冲洗瓶壁以确保试剂完整移出，最后定容至1L并混匀，滤过022μm有机相膜备用。
2. 流动相B的配制：取适量超纯水溶解流动相B，转移至1L容量瓶中，冲洗瓶壁并加入色谱级甲醇和色谱级Y腈，随后定容至1L，混匀并滤过022μm有机相膜。
3. 将配制好的流动相A与B超声波处理30分钟，以去除溶剂中气体，防止色谱柱的阻塞。
4. 标准溶液的配制（标准品需用户自备）：取氨基酸标准品，使用0.1M HCl溶解为100μg/mL或1mM的标准溶液，滤过022μm水相膜。
5. 衍生试剂的配制：取60mg的试剂一，加入0.5mL试剂二、45mL试剂三及50μL试剂四，混匀并避光保存。此配制可获得约5mL的衍生化试剂，足以进行25次手动衍生，操作时可根据需要调整配制量。

设备设置：

1. 开启计算机及液相色谱仪各模块开关（使用FLD检测器），安装C18色谱柱（46×250mm，耐水性≥90%），在软件中设置柱温为35℃，流速为1mL/min，激发波长为340nm，发射波长为450nm，完成洗脱程序设置并保存。
2. 在进样前，使用初始流动相（流动相A：流动相B=90:10）对色谱柱进行平衡，至少30分钟以上，待基线稳定后开始进样。
3. 自动衍生操作（进样程序的设定）：吸取1μL的氨基酸标准溶液和2μL的衍生试剂，混合并等待1分钟后进样。
4. 如色谱仪不具备自动衍生功能，可手动衍生：取100μL的氨基酸标准溶液，加入200μL的衍生试剂及200μL的试剂三，涡旋混合后静置1分钟并过022μm有机相膜，然后上样。
5. 实验需同时做空白对照：用等量0.1M HCl重复上述步骤，以排除干扰。

检测结果示例

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